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免疫标记电镜技术
(1)原理:是利用电镜下可见的示踪标记物标记特异性抗体(或抗原),使之与组织超薄切片中的相应抗原(或抗体)反应,形成不溶性免疫复合物,用电镜观察可见的标记物,间接证实免疫反应的发生。
(2)常用的免疫标记电镜技术:
①铁蛋白标记免疫电镜技术:抗体与铁蛋白通过低分子量的双功能试剂结合为一种双分子复合物。
②酶标记免疫电镜技术:是以酶作为抗原抗体反应的标记物,与相应的酶底物作用,形成一种不溶性的反应产物。包括酶标记抗体法、非标记抗体酶法和非标记的过氧化物酶-抗过氧化物酶技术(即PAP法)。
③胶体金标记免疫电镜技术:是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需外加染色。
免疫球蛋白的概述
(1)免疫球蛋白(Ig)掌握:是由浆细胞产生,存在于血液和体液(包括组织液和外分泌液)中,也可作为抗原受体表达于B细胞表面。多数Ig具有抗体活性,可以特异性识别和结合抗原。抗体是机体在抗原刺激下,由浆细胞合成分泌产生的具有与相应抗原发生特异性结合的球蛋白,即具有免疫功能的球蛋白。所有的抗体均是免疫球蛋白,但并非所有免疫球蛋白都是抗体。
(2)化学结构①Ig的基本结构:Ig分子由4条肽链借链间二硫键连接组成,即2条相同的重链(H)和2条相同的轻链(L)和几对二硫键连接成一个基本单位,称为单体。IgG、IgE.IgD及多数血清型IgA皆为单体,分泌型IgA为双体,IgM为五聚体。
②功能区:Ig分子的H链与L链各区段可通过链内二硫键折叠成彼此相似球状结构,担负特定免疫学功能,称为功能区。L链有两个功能区,称为VL、CL.③Ig的水解片段:Ig分子可被许多蛋白酶水解,产生不同的片段。
(3)免疫球蛋白的血清型①同种型;②同种异型;③独特型:抗原决定簇可在异种、同种异体以及自体内诱导产生相对应的抗体,称为抗独特型抗体。独特型和抗独特型抗体将整个抗体组成一个网络,称独特型网络。
(4)免疫球蛋白的生物学活性抗体是具有双功能分子,它既可特异性结合抗原,又可独立诱发或执行一系列生物学效应,由抗体分子不同部位分别执行。①与抗原结合作用;②补体活化作用;③亲细胞作用;④调理作用;⑤膜传递作用。