(4)参考值：成熟中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)的积分值为7～51。由于各实验室的实验条件不同，正常值也有差异，应建立本实验室的正常值。这里的正常值仅供参考。
(5)临床意义
1)生理变化：①年龄变化：新生儿NAP活性增高，以后下降。儿童期各年龄大致相似，成年期较儿童期活性减低，老年期更低。②应激状态下的变化：紧张、恐惧、激烈运动等NAP活性可增高。③月经周期中的变化：经前期增高，行经后降低，经后期恢复。④妊娠期的变化：妊娠2～3个月的NAP积分值轻度增高，以后逐月增高，分娩时达高峰，产后则恢复正常。
2)病理性变化：①感染：细菌性感染时NAP积分值增高。在细菌性感染中球菌性感染较杆菌性感染为高;在球菌性感染中，急性较慢性为高。病毒性感染时，NAP积分值一般无明显变化。因此本染色法有时可帮助鉴别细菌性感染和病毒性感染;②血液病：慢性粒细胞白血病的NAP积分值明显减低，常为“0”，缓解时NAP积分值上升到正常。类白血病反应时的NAP积分值明显增高，中性杆状核粒细胞的碱性磷酸酶活性增强，甚至中性晚幼粒细胞也呈阳性反应。因此本法常用来鉴别慢粒和类白血病反应及观察慢粒疗效的指标之一;急性粒细胞白血病时NAP积分值减低，急性淋巴细胞白血病时NAP积分值一般增高，因此本法可作为鉴别急粒和急淋的方法之一;急性单核细胞白血病时NAP积分值一般减低，有时可正常;粒细胞白血病合并细菌性感染时NAP积分值可增高，但不如单纯细菌性感染增高的明显;再生障碍性贫血的NAP积分值增高，当病情好转时，NAP积分值可下降，完全缓解时NAP活性可恢复到正常，因此本法对再障的诊断、疗效观察和估计病情均有一定意义;阵发性睡眠性血红蛋白尿的NAP积分值减低，因此本法可作为鉴别阵发性睡眠性血红蛋白尿和再生障碍性贫血的方法之一;真性红细胞增多症的NAP积分值升高，而继发性红细胞增多症的NAP积分值无明显变化。因此本法可用来鉴别真性红细胞增多症和继发性红细胞增多症;骨髓增生异常综合征的NAP积分值减低;③其他
3)其他应用肾上腺皮质激素、雌激素和ACTH后NAP积分值增高。
酯酶染色
酯酶存在于不同的白细胞中，根据不同的底物显示酶的活性，可将酯酶分成三种，包括萘酚-AS-D氯乙酸酯酶、α-乙酸萘酚酯酶和α-丁酸萘酚酯酶。萘酚-AS-D氯乙酸酯酶为粒系细胞所特有，又称特异性酯酶染色。α-乙酸萘酚酯酶可存在于多种细胞，故又称非特异性酯酶染色。α-丁酸萘酚酯酶主要存在于单核系细胞中，又称单核细胞酯酶。三种酯酶染色对不同细胞的识别和急性白血病的诊断与见鉴别有一定意义。下面分别介绍。
4.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色(AS-D-NCE)
(1)原理血细胞内的氯乙酸AS-D萘酚酯酶将基质液中的氯乙酸AS-D萘酚水解，产生萘酚AS-D，进而与基质液中的坚牢蓝GBC偶联，形成不溶性红色沉淀，定位于胞质内。属于特异性酯酶染色。
(2)结果判断
阳性结果为胞质内出现红色沉淀：①(一)胞质无色。②(+)胞质呈淡红色。③(++)鲜红色沉淀布满胞质。④(+++)深红色沉淀充满胞质。
(3)正常血细胞的染色反应
1)粒细胞系统：原始粒细胞为阴性反应或阳性反应，自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均为阳性反映，酶活性并不随细胞的成熟而增强。嗜酸性粒细胞为阴性反应或弱阳性反应，嗜碱性粒细胞为阳性反应。
2)其他血细胞、单核细胞为阴性反应，个别可呈弱阳性反应。淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞和血小板均呈阴性反应。
(4)临床意义：鉴别急性白血病的类型。急性粒细胞白血病时，白血病性原始粒细胞可出现阳性反应;急性单核细胞白血病及急性淋巴细胞白血病时，白血病细胞均呈阴性反应;急性粒-单核细胞白血病时，部分白血病细胞可呈阳性反应(原粒和早幼粒)。有些白血病细胞呈阴性反应(原始单核和幼单核细胞)。
5.α-醋酸萘酚酯酶染色( α-NAE)
(1)原理血细胞内的α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)将基质液中的α-醋酸萘酚水解，产生α-萘酚，萘酚再与坚牢蓝B偶联，形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀，定位于胞质内。属于非特异性醋酸染色。
(2)结果判断：染色阳性结果为胞质中出现棕黑色颗粒沉淀。
(3)正常血细胞的染色反应
1)单核细胞系统原始单核细胞为阴性反应或弱阳性反应;幼单核细胞和单核细胞为阳性反应，这种反应可被氟化钠抑制。
2)粒细胞系统各期粒细胞为阴性反应，有时少数粒细胞可呈弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制。
3)巨核细胞和血小板为阳性反应。
4)其他血细胞幼红细胞和淋巴细胞一般为阴性反应，有时少数细胞也可是弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制;浆细胞为阴性反应。
(4)临床意义
1)帮助鉴别急性白血病的类型：单核细胞白血病时，白血病原始单核细胞可呈阳性反应，幼单核细胞和单核细胞大多呈阳性反应，此反应能被氟化钠抑制，抑制率在50%以上;急性粒细胞白血病时，白血病原始粒细胞为阴性反应，有时个别白血病原始粒细胞可呈阳性反应，但此反应不被氟化钠抑制;急性淋巴细胞白血病时，白血病原始淋巴细胞为阴性反应，有时原始淋巴细胞可出现阳性反应，主要见于T细胞型急淋;急性粒-单核细胞白血病时，部分原始白血病细胞呈阳性反应，并能被氟化钠抑制，这些白血病细胞可能是单核细胞系细胞，部分白血病细胞呈阴性反应，可能是粒细胞系细胞。
2)红血病和红白血病：异常幼红细胞可呈阳性反应。
3)巨幼细胞贫血：巨幼细胞也可呈阳性反应。
6.醋酸AS-D萘酚酯酶染色(AS-D-NAE)和氟化钠抑制试验
(1)原理：血细胞内的醋酸AS-D萘酚酯酶与重氮盐偶联，形成不溶性蓝色沉淀，定位于胞质内。氟化钠抑制试验是以相同方法制备2份基质液，其中一份加入适量氯化钠，另一份不加氟化钠作对照。将已固定的2张相同标本的涂片混入这2种不同基质液中，分别作醋酸AS-D萘酚酯酶染色。属于非特异性酯酶染色。用油镜观察计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率和阳性积分，按下述公式计算出抑制率。
抑制率(%)=(抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分)/抑制前阳性率或阳性积分×100
所谓抑制是指氟化钠试验的抑制率大于50%。
(2)结果判断：染色阳性结果为胞质中出现棕黑色颗粒沉淀：①(一)无颗粒沉淀，为0分。②(±)颗粒少量、稀疏，为0.5分。③(+)胞质内1/2区域出现颗粒沉淀，为l分。④(++)胞质内3/4区域出现颗粒沉淀，为2分。⑤(+++)胞质内布满颗粒沉淀，为3分。⑥(++++)胞质内充满浓密的颗粒沉淀，为4分。
(3)正常血细胞的染色：
1)粒细胞系统：原粒细胞为阴性反应或阳性反应，自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均为阳性反应，一般为(+)～(++)，此反应不被氟化钠抑制。
2)单核细胞系统：原始单核细胞为阴性反应或阳性反应，幼单核细胞和单核细胞均为阳性反应，一般为(++)～(+++)，此反应能被氟化钠抑制。
3)淋巴细胞：淋巴细胞呈弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制。
4)红细胞系统：早期幼红细胞可呈阳性反应，随细胞的成熟阳性反应程度逐渐减弱，此反应不被氟化钠抑制。
5)巨核细胞和血小板：为阳性反应。
(4)临床意义：帮助鉴别急性白血病的类型。急性粒细胞白血病时，白血病原始粒细胞可呈阳性反应，此反应不被氟化钠抑制。急性单核细胞白血病时，白血病原始单核细胞可呈阳性反应，幼单核细胞和单核细胞为阳性反应，此反应被氯化钠抑制。急性粒-单核细胞白血病时，部分白血病细胞的阳性反应可被氟化钠抑制，部分阳性反应不被氟化钠抑制。
7.碱性α-丁酸萘酚酯酶染色( α-NBE)
(1)原理：血细胞内的α-丁酸萘酚酯酶(α-NBE)在pH碱性的条件下水解基质液中的α-丁酸萘酚，释放出α-萘酚，后者与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。α-NBE主要存在于单核细胞中，其阳性产物能被氟化钠抑制，而其他细胞系列的阳性产物不能被氟化钠抑制。属于单核细胞酯酶染色。
(2)结果判断：阳性结果为胞质中出现蓝色颗粒。
(3)正常血细胞的染色反应
1)粒细胞系统：各期粒细胞均呈阴性。
2)单核细胞系统：分化差的原单细胞呈阴性，分化好的原单细胞呈阳性，幼稚及成熟的单核细胞呈阳性，阳性反应能被氟化钠抑制。
3)淋巴细胞系统：外周血的T淋巴细胞、非T非B淋巴细胞可呈阳性，B淋巴细胞呈阴性。
4)其他细胞：巨核细胞、幼红细胞、浆细胞呈阴性或弱阳性;组织细胞也可呈阳性，但不被氟化钠抑制。
(4)临床评价：与α-NAE染色的临床意义相同，敏感性不如α-NAE，而特异性较α-NAE高，是急性白血病常用的细胞化学染色。
1)辅助鉴别急性白血病细胞类型：①急性单核细胞白血病：单核系细胞大多数呈阳性，阳性反应能被氟化钠抑制;②急性粒细胞白血病：原粒细胞一般呈阴性;③急性早幼粒细胞白血病：早幼粒细胞常呈阴性;④急性粒单细胞白血病：部分白血病细胞阳性，部分白血病细胞阴性;⑤急性淋巴细胞白血病：原始及幼稚淋巴细胞一般呈阴性。
2)急性单核细胞白血病有时须与恶性组织细胞病相鉴别，异常组织细胞也可呈阳性，但阳性反应不能被氟化钠抑制。
8.酸性磷酸酶染色(ACP)
(1)原理：血细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下，将基质中的磷酸萘酚AS-BI水解，释放萘酚AS-BI，萘酚AS-BI与六偶氮付品红偶联，形成不溶性红色沉淀，定位于胞质内，如果血细胞的胞质呈红色为阳性反应，无红色为阴性反应。抗酒石酸酸性磷酸酶染色是用相同方法制备2份基质液，一份再加入适量L-酒石酸，另一份不加L-酒石酸。取两张相同标本的涂片，分别用这2种不同基质液作酸性磷酸酶染色。如果血细胞内的酸性磷酸酶耐L-酒石酸抑制的都呈阳性反应。如果不耐L-酒石酸抑制的，不加L-酒石酸的呈阳性反应，而加L-酒石酸的呈阴性反应。
(2)结果判断：阳性结果为胞质中出现鲜红色颗粒沉淀：①(一)胞质无色。 ②(+)胞质出现淡红色颗粒。③(++)胞质布满鲜红色颗粒。④(+++)胞质充满深红色颗粒。
(3)正常血细胞的染色反应：粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞呈阳性。
(4)临床意义
1)帮助鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞，前者酸性磷酸酶染色为阳性反应，后者为阴性。
2)帮助诊断多毛细胞白血病，多毛细胞白血病时多毛细胞的酸性磷酸酶染色为阳性反应，此酶耐L-酒石酸的抑制作用。淋巴肉瘤细胞和慢性淋巴细胞白血病的淋巴细胞，酸性磷酸酶染色也呈阳性反应，但此酸可被L-酒石酸抑制。
3)帮助鉴别T淋巴细胞和B淋巴细胞，T淋巴细胞呈阳性反应，而B淋巴细胞为阴性反应。
9.铁染色
(1)原理：细胞外含铁血黄素和幼红细胞内的铁与酸性亚铁氰化钾发生普鲁士蓝反应，形成蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位。
(2)正常血细胞的染色反应
1)细胞外铁：观察骨髓小粒中的铁，呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状。根据骨髓小粒中铁的存在方式及量将细胞外铁分为(一)、(+)、(++)、(+++)、(++++)。
2)细胞内铁：观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞计算出铁粒幼红细胞的百分比。铁粒幼红细胞是指胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞，根据蓝色铁颗粒多少、粗细分为I型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及环形铁粒幼红细胞。环形铁粒幼红细胞是指幼红细胞胞质内蓝色在6颗以上，围绕核周二分之一以上者。成熟红细胞中出现铁颗粒称为铁粒红细胞。
(3)参考值
1)细胞外铁：(+)～(++)，大多为(++)。
2)铁粒幼细胞：19%～44%
由于各实验室的实验条件不同，正常值也有差异，应建立本实验室的正常值。
(4)临床意义
1)缺铁性贫血时，骨髓细胞外铁明显减低，甚至消失;铁粒幼细胞的百分率减低。经有效铁剂治疗后，细胞外铁增多;因此铁染色可作为诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的重要方法。
2)铁粒幼细胞贫血时，出现较多环铁粒幼细胞，铁粒幼细胞也增多，其所含铁颗粒的数目也较多，颗粒也粗大，有时还可见铁粒红细胞。因此本染色可作为诊断铁粒幼细胞性贫血的重要方法。
补充：酯酶双染色
1.原理：
在同一张涂片上进行两种酯酶染色的方法称为酯酶双染色。一般采用一种特异性酯酶染色加一中非特异性酯酶染色，故常用的有氯乙酸AS-D萘酚酯酶和α-醋酸萘酚酯酶双染色，氯乙酸AS-D萘酚酯酶和α-丁酸萘酚酯酶双染色。反应原理同各自的染色原理。
2.临床意义
这种染色对诊断急性粒-单核细胞白血病具有独特的价值，即在同一张片中出现两种酯酶染色阳性或同一种细胞同时出现两种酯酶染色阳性结果。
二、血细胞化学染色的临床应用
参见上述内容。
1.急性白血病类型的鉴别
2.贫血类型的鉴别
表6 三种常用细胞化学染色在鉴别急性白血病类型中应用
|
化学染色 |
急粒白血病 |
急单白血病 |
急淋白血病 |
|
POX |
分化差的原始细胞 |
（-）-（+） |
（-） |